Σύμφωνα με στατιστικά στοιχεία του ΠΟΥ, τα τελευταία 40 χρόνια, 25 εκατομμύρια άνθρωποι έχουν πεθάνει από AIDS. Η ζημιά από αυτή τη μόλυνση είναι τεράστια. Οι περισσότεροι από τους μολυσμένους αποδείχθηκε ότι ήταν στην Αφρική, από όπου προήλθε αυτή η μόλυνση. Με τον HIV, η διάγνωση της νόσου γίνεται ιδιαίτερα σημαντική. Είναι αλήθεια ότι δεν υπάρχουν ακόμη θεραπείες για τον HIV, αλλά η έγκαιρη θεραπεία μπορεί να παρατείνει τη ζωή του ασθενούς και να βελτιώσει την ποιότητά του.
Διάγνωση μόλυνσης από HIV
Η Η λοίμωξη από HIV προσδιορίζεται σε διαφορετικά στάδια με τις ακόλουθες μεθόδους:
- ELISA - ενζυμική ανοσοδοκιμασία.
- Western blot.
- PCR - αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης.
- Ταχεία τεστ.
Η μέθοδος PCR αναπτύχθηκε από τον Αμερικανό βιοχημικό Kary Mullis, ο οποίος έλαβε το Νόμπελ για αυτήν το 1983. Σήμερα, αυτή η μέθοδος στην ιατρική στη διάγνωση όλων των λοιμώξεων θεωρείται η κορυφαία λόγω της ακρίβειας και του πληροφοριακού περιεχομένου της. Ο HIV δεν αποτελεί εξαίρεση από αυτή την άποψη.
Η ουσία της ανάλυσης
Οποιοδήποτε ζωντανό κύτταρο περιέχει RNA και DNA. Αυτά τα νουκλεϊκά οξέα είναι ικανά να αυτοαντιγραφούν και να αυτοαναπαραχθούν. Για κάθε μόλυνση, τα θραύσματα DNA είναι μοναδικά. ΣΤΟσε βιολογικά υγρά, αυτά τα θραύσματα νουκλεϊκών οξέων κυκλοφορούν. Συλλαμβάνονται και αναγνωρίζονται από ειδικό εξοπλισμό - τον αντιδραστήρα. Αυτή είναι η βάση της μεθόδου. Ο βοηθός εργαστηρίου μετράει αυτά τα θραύσματα. Ο ρετροϊός HIV παρακολουθείται για RNA. Ακόμη και με μεμονωμένα αντίγραφα ιικών σωματιδίων, η PCR μπορεί να τα ανιχνεύσει και να τα μετρήσει.
Το φλεβικό αίμα χρησιμοποιείται συχνότερα ως υγρό εξέτασης. Τα ειδικά συστατικά της μεθόδου συνδέονται με τα σωματίδια του ιού και τα καθιστούν ανιχνεύσιμα, επειδή τα θραύσματα που βρέθηκαν πολλαπλασιάζονται.
Στην περίπτωση του HIV, το αποτέλεσμα της παρουσίας του ιού μπορεί να ληφθεί πολύ πριν εμφανιστεί η κλινική. Επομένως, λόγω της υψηλής ευαισθησίας της, η PCR έχει τόσο υψηλή διαγνωστική αξία. Ένα τεράστιο πλεονέκτημα της PCR είναι η ευελιξία της μεθόδου. Η περίοδος επώασης της μόλυνσης για PCR δεν αποτελεί εμπόδιο.
Κόστος έρευνας
Η Η μέθοδος PCR είναι αρκετά ακριβή. Αυτό είναι ένα από τα μεγάλα του μειονεκτήματα. Απαιτεί τον πιο πρόσφατο εξοπλισμό και άριστα καταρτισμένο εργαστηριακό βοηθό. Λαμβάνοντας υπόψη τα παραπάνω, διαγνωστικά PCR δεν γίνονται σε μικρούς οικισμούς. Μπορείτε να κάνετε εξετάσεις μόνο σε εξειδικευμένες μεγάλες κλινικές.
Το κόστος του τεστ DNA HIV στις κλινικές της Μόσχας ξεκινά από 2.800 ρούβλια, το ιικό φορτίο (ιικό RNA στο πλάσμα) προσδιορίζεται με PCR - από 8.800 ρούβλια και η αντίσταση στον HIV σε αναστολείς πρωτεάσης - από 16.500 ρούβλια. Όπως μπορείτε να δείτε, οι τιμές είναι αρκετά υψηλές. Η PCR μπορεί να γίνει δωρεάν σε δημόσιες κλινικές σύμφωνα με την πολιτική MHI. Σπουδαίος,ότι η διαδικασία μπορεί να γίνει ανώνυμα. Στο μητρώο, ο ασθενής λαμβάνει έναν αριθμό με τον οποίο μπορεί να μάθει το αποτέλεσμα. Στα σύγχρονα ιατρικά κέντρα υπάρχουν προσωπικοί λογαριασμοί πελατών όπου θα καταχωρούνται αυτά τα δεδομένα.
Στόχοι έρευνας
Διαγνωστικά PCR για HIV συνταγογραφούνται σε τέτοιες περιπτώσεις:
- Ανίχνευση λοίμωξης σε παιδί που γεννήθηκε από άρρωστη μητέρα ή φορέα για τον προσδιορισμό της ενδομήτριας λοίμωξης.
- Εάν η ELISA έδωσε αμφισβητήσιμα αποτελέσματα (η PCR για τον HIV βοηθά σε αυτή την περίπτωση να γίνει τελική διάγνωση).
- Για τον εντοπισμό της ποσοτικής περιεκτικότητας του ιού στον οργανισμό.
- Με ένα θετικό ανοσοστύπωμα, αλληλοσυμπληρώνονται με PCR.
- Δοκιμάζοντας δότες.
- Για έγκαιρη διάγνωση του HIV.
- Για να προσδιοριστεί η αποτελεσματικότητα και η αντοχή στην ART.
Το πλεονέκτημα αυτής της ανάλυσης είναι ότι η PCR για τον HIV μπορεί να πραγματοποιηθεί ακόμη και σε παιδιά κάτω του ενός έτους.
Η έρευνα συχνά δεν πραγματοποιείται για πρωτογενή διάγνωση, αλλά βρίσκεται ήδη στη διαδικασία της θεραπείας. Τα κύρια διαγνωστικά είναι οι ορολογικές μελέτες (καθορίζουν το επίπεδο των αντισωμάτων στον HIV). Εάν επαναληφθεί ένα ψευδώς θετικό αποτέλεσμα, αυτό μπορεί να είναι με χαμηλό ιικό φορτίο.
Η PCR διαγιγνώσκει HIV όταν δεν υπάρχουν ακόμη αντισώματα σε αυτόν. Η μέθοδος ELISA σε αυτή την περίπτωση δεν θα δώσει απάντηση.
Και η PCR για τον HIV θα είναι ήδη θετική. Αλλά τα συμπτώματα αυτής της περιόδου του HIV δεν είναι ειδικά. Ο ασθενής αντιμετωπίζεται αρχικά για μεγάλο χρονικό διάστημα και ανεπιτυχώς για ARVI από γενικό ιατρό. Θα πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι η διάγνωση του HIV βασίζεται μόνο σεΗ PCR δεν τίθεται, είναι απαραίτητο να περάσετε άλλες ολοκληρωμένες δοκιμές. Η μέθοδος PCR είναι πιο συχνά βοηθητική για δύσκολες περιπτώσεις.
Προετοιμασία για ανάλυση
Πριν από τη λήψη PCR για τον HIV, 2 ημέρες πριν από την εξέταση, δεν πρέπει να τρώτε λιπαρά τρόφιμα, αλκοόλ. Είναι επίσης καλύτερο να μην καταπονείστε ψυχικά και σωματικά. Εάν ο ασθενής έχει συνταγογραφηθεί μια πορεία ανοσοδιέγερσης, διακόπτεται 2 εβδομάδες πριν από την ανάλυση.
Το αίμα λαμβάνεται καλύτερα το πρωί. Μπορούν επίσης να εξεταστούν και άλλα βιολογικά υγρά του σώματος (σπέρμα, κολπική έκκριση), αλλά το αίμα είναι το καλύτερο υλικό. Το σάλιο, ο ιδρώτας, τα ούρα και τα δάκρυα δεν χρησιμοποιούνται, καθώς η περιεκτικότητα του ιού σε αυτά είναι ελάχιστη.
Πλεονέκτημα της PCR για τον HIV
Τα πλεονεκτήματα της μεθόδου είναι η εξαιρετικά χαμηλή πιθανότητα ψευδώς θετικού αποτελέσματος, η καθολικότητα της αντίδρασης για τυχόν βιολογικά υγρά του σώματος. Η ανάλυση έχει μεγάλο εύρος:
- Μια αιμοληψία μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τον εντοπισμό διαφορετικών λοιμώξεων.
- Η τεχνική είναι επείγουσα, το αποτέλεσμα είναι έτοιμο την επόμενη κιόλας μέρα.
- Η εμπιστοσύνη είναι μεταξύ 85 και 98%.
- Η παρουσία του HIV μπορεί να προσδιοριστεί 10-14 ημέρες μετά τη μόλυνση (δεν υπάρχουν ακόμη αντισώματα αυτήν τη στιγμή).
- Χωρίς όριο ηλικίας, μπορεί να πραγματοποιηθεί αμέσως από τη γέννηση.
Μειονεκτήματα της μεθόδου
Τα μειονεκτήματα της PCR είναι τα εξής:
- Κόστος ανάλυσης.
- Απαιτεί εξελιγμένο ιατρικό εξοπλισμό.
- Απαιτείται εργαστηριακός βοηθός και γιατρός υψηλής ειδίκευσης,ανάλυση λήπτη.
- Η αντίδραση είναι πολύ ευαίσθητη, επομένως το σφάλμα μπορεί να είναι 20%.
- Μπορεί να οδηγήσει σε ψευδώς θετικό αποτέλεσμα εάν ο ασθενής έχει αυτοάνοσες διεργασίες, ογκολογία, χρόνιες λοιμώξεις.
- Ειδική καθαριότητα των χώρων του εργαστηρίου είναι απαραίτητη, γιατί ο ιός μπορεί να εισέλθει στην ανάλυση από τον αέρα. Τότε το αποτέλεσμα θα είναι λάθος.
Για εργαστήρια που διεξάγουν PCR, για τη βελτίωση της ποιότητας των διαγνωστικών, έχουν αναπτυχθεί ειδικά αυστηρά μέτρα σύμφωνα με το σύστημα SanPiN για εσωτερικό έλεγχο. Επιπλέον, πρέπει να τηρούνται όλοι οι κανόνες εργασίας με αυτήν την τεχνική:
- Απαιτείται αυστηρή τήρηση των πληροφοριών στους δοκιμαστικούς σωλήνες.
- Πριν από τη δειγματοληψία αίματος, κοιτάξτε ξανά και βεβαιωθείτε ότι η ανάλυση έχει προγραμματιστεί.
- Η νοσοκόμα πρέπει να επισημαίνει σωστά τα σωληνάρια.
- Ο βοηθός εργαστηρίου πρέπει να πραγματοποιεί σωστά όλους τους χειρισμούς με το βιοϋλικό προκειμένου να αποφευχθεί η διασταυρούμενη μόλυνση.
- Το σύστημα δοκιμών πρέπει να είναι εξαιρετικής ποιότητας.
Μόνο εάν πληρούνται όλες αυτές οι προϋποθέσεις, το σφάλμα στην απάντηση μπορεί να είναι μόνο το 2% περίπου των επεισοδίων.
Διάρκεια ανάλυσης
Πολλοί ενδιαφέρονται για πόσο καιρό θα είναι έτοιμη η PCR για τον HIV. Η διάγνωση διαρκεί όχι περισσότερο από 8 ώρες. Ο ασθενής μπορεί να λάβει απάντηση την επόμενη κιόλας μέρα. Η γρήγορη δοκιμή εκτελείται εντός 2 ωρών.
Αξιοπιστία PCR
Παρά τα πολλά πλεονεκτήματά της, η PCR δεν θεωρείται ιδανική διαγνωστική μέθοδος. Σε περίπτωση που επικοινωνεί μαζί τουτην ανάγκη λήψης προληπτικών εξετάσεων για την παρουσία HIV στον οργανισμό.
Πότε λαμβάνεται αίμα για ανάλυση;
Πόσο καιρό να λαμβάνω PCR για τον HIV; Ένα αξιόπιστο αποτέλεσμα μπορεί να ληφθεί ήδη κατά τη λήψη αίματος 4-4 ημέρες μετά την υποτιθέμενη μόλυνση. Μετά από 2 εβδομάδες, η αξιοπιστία για τον HIV θα είναι 98%, και με περίοδο 5 ημερών - 80%. Η παρουσία αρνητικού αποτελέσματος στην PCR για τον HIV θα είναι αξιόπιστη, αλλά για απολύτως ακριβές αποτέλεσμα, πραγματοποιείται επίσης ELISA.
Η ανάλυση Η ανάλυση ELISA θα είναι αποτελεσματική μόνο εάν υπάρχουν αντισώματα για τον ιό, αυτός ο χρόνος μπορεί να διαρκέσει από 1-3 μήνες έως έξι μήνες. Δεδομένου ότι η ELISA δίνει μεγαλύτερη πιθανότητα (98% -99,9%), η PCR δεν μπορεί να ονομαστεί 100% επιβεβαιωτική εξέταση για την παρουσία λοίμωξης HIV. Αλλά από την άλλη, αυτή είναι η μόνη τεχνική στην οποία δεν χρειάζεται να περιμένετε την εμφάνιση αντισωμάτων.
Με τον HIV, η PCR μπορεί να παρέχει πληροφορίες σχετικά με την αποτελεσματικότητα της ART, το στάδιο της νόσου του HIV και τον αριθμό των VNs (ποσοτική αξιολόγηση της παρουσίας του HIV στο σώμα). Αυτό θα μιλήσει για τη σοβαρότητα και την έκταση της αλλαγής.
Ο έλεγχος PCR για HIV είναι επίσης απαραίτητος εάν υπάρχουν αντισώματα στο αίμα, αλλά η παρουσία τους δεν υποδεικνύει την αξιοπιστία της λοίμωξης HIV κλινικά.
Ελέγχονται όχι μόνο για μόλυνση και περιστασιακό σεξ. Άλλες περιπτώσεις:
- Σχεδιάζω εγκυμοσύνη.
- Επερχόμενη λειτουργία.
- Περιστασιακό σεξ.
- Ορισμένα επαγγέλματα απαιτούν αυτό το τεστ για την εισαγωγή τους στην εργασία (δάσκαλοι, γιατροί και άλλο ιατρικό προσωπικό).
- Prisoners.
- ασθενείς με φυματίωση.
- Εργαζόμενοι του Υπουργείου Εκτάκτων Καταστάσεων και της αστυνομίας.
- Επέστρεψε από διακοπές από εξωτικές χώρες (αν θέλετε να βεβαιωθείτε ότι δεν υπάρχει μόλυνση).
- Πόρνες.
- Ξένοι φοιτητές.
- Drugs.
Επίσης, ορισμένα συμπτώματα σε έναν ασθενή μπορεί να αναγκάσουν ένα τεστ HIV:
- Ξαφνική απώλεια βάρους.
- Διάρροια που διαρκεί περισσότερο από 3 εβδομάδες
- Αδικαιολόγητη υψηλή θερμοκρασία για μεγάλο χρονικό διάστημα.
- διογκωμένοι λεμφαδένες.
- Ανεξήγητη αιτία πνευμονίας, καντιντίασης κ.λπ.
Η αποκρυπτογράφηση της ανάλυσης είναι προνόμιο του θεράποντος ιατρού και όχι του βοηθού εργαστηρίου.
PCR ή ELISA, ποιο είναι καλύτερο;
Όταν η PCR-διάγνωση του RNA του ιού HIV ανιχνεύεται τόσο ποιοτικά όσο και ποσοτικά. Αυτή η ανάλυση προσδιορίζει ξεκάθαρα ένα συγκεκριμένο παθογόνο, ακόμη και αν υπάρχουν πολλά παθογόνα που αντιδρούν διασταυρούμενα. Το βιολογικό υλικό μπορεί να χρησιμοποιηθεί ακόμη και σε αποξηραμένη μορφή. Το μειονέκτημα είναι η υψηλή ευαισθησία της PCR, όταν ένα ψευδώς θετικό αποτέλεσμα μπορεί να δοθεί από την παρουσία έστω και μικροσκοπικής ποσότητας ξένου DNA σε όργανα ή σε δοκιμαστικό σωλήνα.
Το καθήκον και η δυνατότητα της ELISA είναι να προσδιορίσει την παρουσία αντισωμάτων σε έναν ρετροϊό. Αν και η ακρίβειά του είναι 99%, δεν εφαρμόζεται στα αρχικά στάδια.
Ποιοτικό τεστ HIV
Η υψηλής ποιότητας PCR για τον HIV καθορίζει την παρουσία του ιού στο σώμα. Τα αποτελέσματα σε αυτή την περίπτωση θα μοιάζουν με αυτό: θετικό, ψευδώς θετικό, αρνητικό. Αλλά αυτή η μελέτη δεν θα δώσει πληροφορίες σχετικά με την ποσότητα του ρετροϊού. Τέτοια ποιοτική ανάλυσηακατάλληλο όταν η μόλυνση από τον ιό HIV έχει ήδη ανιχνευθεί στο σώμα με άλλα μέσα.
Είναι αδύνατο να ελεγχθεί η αποτελεσματικότητα της θεραπείας με υψηλής ποιότητας PCR.
ποσοτικοποίηση HIV
Εκτελείται μόνο από άτομα που έχουν μολυνθεί από τον ιό HIV προκειμένου να μετρηθεί ο αριθμός των αντιγράφων του RNA του ιού σε ένα βιολογικό προϊόν.
Σκοπός μιας τέτοιας μελέτης είναι η παρακολούθηση της συνεχιζόμενης θεραπείας και ο εντοπισμός της αντοχής του ιού σε αυτήν. Η αντιική θεραπεία σε τέτοιους υπολογισμούς δεν συνταγογραφείται τυφλά από γιατρό, επομένως θα είναι πιο αποτελεσματική. Η ποσοτική PCR για τη μόλυνση από τον ιό HIV γίνεται πολύ πιο συχνά. Αυτή η ανάλυση εμφανίζεται ως αντίγραφο/ml αίματος.
Τι αποτελέσματα μπορούν να δοθούν:
- Το RNA του ιού απουσιάζει ή είναι πολύ μικρό (περίπου 20 αντίγραφα/ml). Καμία βεβαιότητα διάγνωσης.
- Από 20 - έως 10 έως αντίγραφα 6ου βαθμού / ml - η διάγνωση είναι αξιόπιστη.
- Περισσότερα από 106 αντίγραφα/ml - υψηλό VN.
Τα εργαστήρια μπορούν να πραγματοποιήσουν δοκιμές PCR σε πραγματικό χρόνο για HIV. Αυτό συνεπάγεται την παρατήρηση και την αριθμητική αξιολόγηση της συσσώρευσης προϊόντων PCR με αυτόματη καταγραφή των αποτελεσμάτων.
