Πρόσφατα, αναπτύχθηκε μια αξιόπιστη, εξαιρετικά ευαίσθητη και γρήγορη μέθοδος για τη διάγνωση διαφόρων ανθρώπινων μολυσματικών ασθενειών. Αυτή η μέθοδος ονομάζεται «ανάλυση PCR». Τι είναι, ποια είναι η ουσία του, ποιους μικροοργανισμούς μπορεί να αποκαλύψει και πώς να το λάβετε σωστά, θα το πούμε στο άρθρο μας.
Ιστορικό ανακάλυψης
Εφηύρε τη μέθοδο της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης (PCR) από τον Αμερικανό επιστήμονα Kary Mullis το 1983. Αρχικά, η διαγνωστική μέθοδος κατοχυρώθηκε με δίπλωμα ευρεσιτεχνίας από την Cetus Corporation, στην οποία εργαζόταν ο δημιουργός της. Αλλά το 1992, όλα τα δικαιώματα και οι πατέντες πωλήθηκαν στη Hoffman-La Roche. Μετά από αυτό, προέκυψε ότι παρόμοιες μελέτες έγιναν παράλληλα και καταγράφηκαν από άλλους Αμερικανούς βιολόγους, όπως οι Alice Chen, David Edgar, John Trell. Το 1980, οι Σοβιετικοί επιστήμονες A. Slyusarenko, A. Kaledin και S. Gorodetsky ασχολήθηκαν επίσης με αυτό το πρόβλημα. Ως εκ τούτου, ήταν αδύνατο να προσδιοριστεί ο μοναδικός κάτοχος των πνευματικών δικαιωμάτων. Πολλοί εξέχοντες βιοχημικοί έχουν συνεισφέρει στην ανάπτυξη της τεχνικής της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης και έχουν κατοχυρώσει με δίπλωμα ευρεσιτεχνίας τις καινοτομίες τους. Προς το παρόν, η ανάλυσηΗ PCR πραγματοποιείται παντού σε ειδικά εξοπλισμένα εργαστήρια.
Η ουσία της διαγνωστικής μεθόδου PCR
Ανάλυση PCR: τι είναι και πώς λειτουργεί; Η ουσία της μεθόδου είναι η αύξηση του όγκου ενός συγκεκριμένου μικροβιακού περιβάλλοντος υπό τεχνητές συνθήκες χρησιμοποιώντας ένα ειδικό ένζυμο πολυμεράσης DNA. Για αυτό, το υπάρχον υλικό DNA πολλαπλασιάζεται πολλές φορές. Έτσι, παρουσία παθογόνου μικροοργανισμού στο δείγμα, η ποσότητα του θα αυξηθεί λόγω βιοχημικών εργαστηριακών χειρισμών και δεν θα είναι δύσκολο να εντοπιστεί το βακτήριο στο μικροσκόπιο.
Πώς γίνεται η έρευνα υλικού;
Απαιτείται για ανάλυση:
- μήτρα DNA;
- αστάρια που συνδέουν τα άκρα ενός κομματιού υλικού;
- ένζυμο πολυμεράσης DNA ανθεκτικό στη θερμότητα;
- χημικές ουσίες που κάνουν τα ένζυμα να λειτουργούν σωστά;
- ρυθμιστικό διάλυμα απαραίτητο για τη δημιουργία των κατάλληλων συνθηκών για την ανάπτυξη και ανάπτυξη υλικού DNA.
Για να πραγματοποιηθεί PCR, πραγματοποιούνται 25-30 επαναλήψεις, που αποτελούνται από τρία στάδια: μετουσίωση, ανόπτηση και επιμήκυνση.
Για την ανάλυση της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμερούς, χρησιμοποιείται μια ειδική συσκευή - ένας ενισχυτής. Ο σύγχρονος εξοπλισμός σάς επιτρέπει να ορίσετε το απαραίτητο πρόγραμμα για τους σωλήνες θέρμανσης και ψύξης για την εξάλειψη σφαλμάτων κατά τη διάρκεια των διαγνωστικών.
Πού χρησιμοποιούνται τα διαγνωστικά;
Η μέθοδος αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμερούς χρησιμοποιείται σε διάφορους τομείς της ιατρικής:
- εγκληματίες μεπροσδιορίζει γενετικό υλικό όπως τρίχες, σάλιο ή αίμα·
- Η εξέταση αίματος PCR βοηθά στον προσδιορισμό του γονότυπου, για παράδειγμα, στον εντοπισμό μιας μεμονωμένης γενετικά εγγενούς αντίδρασης σε ένα συγκεκριμένο φάρμακο.
- χρησιμοποιώντας αυτήν τη μέθοδο για να διαπιστωθεί η παρουσία οικογενειακών δεσμών μεταξύ των ανθρώπων;
- Η πιο δημοφιλής μέθοδος PCR έχει γίνει στην ιατρική διαγνωστική για τον προσδιορισμό διαφόρων μολυσματικών ασθενειών.
Τι λοιμώξεις ανιχνεύει η PCR;
Έτσι, η ιατρική έχει χρησιμοποιήσει από καιρό και με επιτυχία την ανάλυση PCR. Τι είναι, ξέρουμε ήδη. Και ποια παθογόνα μπορούν να ανιχνευθούν με αυτό; Οι ακόλουθες μολυσματικές ασθένειες διαγιγνώσκονται με τη μέθοδο PCR:
- ηπατίτιδα A, B, C;
- ουρεαπλάσμωση;
- καντιντίαση;
- χλαμύδια;
- μυκοπλάσμωση;
- gardnerellosis;
- λοιμώδης μονοπυρήνωση;
- τριχομονάση;
- λοίμωξη από ιό θηλώματος;
- φυματίωση;
- λοίμωξη από έρπητα τύποι 1 και 2;
- ελικοβακτηρίωση;
- κυτταρομεγαλοϊός;
- διφθερίτιδα;
- σαλμονέλωση;
- λοίμωξη HIV.
Επίσης, οι μέθοδοι PCR χρησιμοποιούνται στη διάγνωση του καρκίνου.
Οφέλη της μεθόδου
Η διάγνωση PCR έχει πολλά πλεονεκτήματα:
- Υψηλή ευαισθησία. Ακόμη και με την παρουσία λίγων μόνο μορίων DNA μικροοργανισμών, η ανάλυση PCR προσδιορίζει την παρουσία μόλυνσης. Η μέθοδος θα βοηθήσει με χρόνιες και λανθάνουσας εμφάνισης ασθένειες. Συχνά σε τέτοιες περιπτώσεις, ο μικροοργανισμόςείναι κατά τα άλλα ακαλλιέργητο.
- Οποιοδήποτε υλικό είναι κατάλληλο για έρευνα, όπως σάλιο, αίμα, εκκρίσεις γεννητικών οργάνων, τρίχες, επιθηλιακά κύτταρα. Η πιο συνηθισμένη είναι η ανάλυση αίματος και ουρογεννητικού επιχρίσματος για PCR.
- Δεν απαιτείται μακροπρόθεσμη καλλιέργεια. Η αυτοματοποιημένη διαγνωστική διαδικασία σάς επιτρέπει να λαμβάνετε τα αποτελέσματα της μελέτης μετά από 4-5 ώρες.
- Η μέθοδος είναι σχεδόν 100% αξιόπιστη. Έχουν καταγραφεί μόνο μεμονωμένες περιπτώσεις ψευδώς αρνητικών αποτελεσμάτων.
- Η ικανότητα εντοπισμού πολλών τύπων παθογόνων από ένα δείγμα υλικού. Αυτό όχι μόνο επιταχύνει τη διαδικασία διάγνωσης της νόσου, αλλά μειώνει επίσης σημαντικά το κόστος υλικού. Συχνά ο γιατρός συνταγογραφεί μια ολοκληρωμένη ανάλυση PCR. Η τιμή της εξέτασης, η οποία αποτελείται από τον προσδιορισμό έξι παθογόνων, είναι περίπου 1.500 ρούβλια.
Συστάσεις για προετοιμασία για ανάλυση
Για να είναι αξιόπιστα τα αποτελέσματα κατά τη διάρκεια της μελέτης PCR, πρέπει να κάνετε το τεστ, ακολουθώντας τις συστάσεις για προκαταρκτική προετοιμασία για διάγνωση:
- Πριν δώσετε σάλιο, θα πρέπει να αποφεύγετε να τρώτε και να παίρνετε φάρμακα 4 ώρες πριν από τη δειγματοληψία. Αμέσως πριν τη διαδικασία, ξεπλύνετε το στόμα σας με βρασμένο νερό.
- Οι παραπάνω κανόνες θα πρέπει επίσης να τηρούνται κατά τη λήψη δείγματος από την εσωτερική επιφάνεια του μάγουλου. Μετά το ξέβγαλμα, συνιστάται να κάνετε ένα ελαφρύ μασάζ στο δέρμα για να τονίσετε την έκκριση του αδένα.
- Τα ούρα συλλέγονται συνήθως στο σπίτι. Για να γίνει αυτό, πρέπει να κάνετε μια σχολαστική τουαλέταγεννητικά όργανα. Συλλέξτε 50-60 ml ούρων σε ένα αποστειρωμένο πλαστικό δοχείο. Για να εξασφαλιστεί η καθαρότητα του υλικού, συνιστάται στις γυναίκες να εισάγουν ένα ταμπόν στον κόλπο και στους άνδρες να τραβούν προς τα πίσω την πτυχή του δέρματος όσο το δυνατόν περισσότερο. Μην κάνετε δωρεές κατά τη διάρκεια της περιόδου σας.
- Για να δωρίσετε σπέρμα, πρέπει να απέχετε από τη σεξουαλική επαφή για 3 ημέρες πριν από τη δειγματοληψία. Οι γιατροί συμβουλεύουν επίσης να μην επισκέπτεστε τη σάουνα και να κάνετε ένα ζεστό μπάνιο, να πίνετε αλκοόλ και πικάντικα τρόφιμα. Πρέπει να αποφύγετε την ούρηση 3 ώρες πριν από την εξέταση.
- Για να λάβετε ένα επίχρισμα ουρογεννητικού συστήματος, για παράδειγμα, εάν πραγματοποιηθεί εξέταση PCR για χλαμύδια, τόσο οι γυναίκες όσο και οι άνδρες συνιστάται να έχουν σεξουαλική ανάπαυση για 3 ημέρες. Τα αντιβακτηριακά φάρμακα δεν πρέπει να λαμβάνονται 2 εβδομάδες πριν από την ανάλυση. Για μια εβδομάδα, πρέπει να σταματήσετε να χρησιμοποιείτε τζελ, αλοιφές, κολπικά υπόθετα, πλύσιμο. 3 ώρες πριν την εξέταση, πρέπει να αποφύγετε την ούρηση. Κατά τη διάρκεια της εμμήνου ρύσεως, δεν γίνεται δειγματοληψία, μόνο 3 ημέρες μετά τη διακοπή της έκκρισης αίματος, μπορείτε να κάνετε ουρογεννητικό επίχρισμα.
PCR κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης
Κατά την περίοδο της αναμονής του μωρού, πολλές σεξουαλικά μεταδιδόμενες λοιμώξεις είναι εξαιρετικά επικίνδυνες για τη φυσιολογική ανάπτυξη του εμβρύου. Τα ΣΜΝ μπορεί να προκαλέσουν ενδομήτρια καθυστέρηση της ανάπτυξης, αποβολή ή πρόωρο τοκετό, συγγενείς δυσπλασίες του παιδιού. Επομένως, είναι εξαιρετικά σημαντικό να υποβληθείτε σε εξέταση PCR στην αρχή της εγκυμοσύνης. Είναι απαραίτητο να περάσετε την ανάλυση κατά την εγγραφή - έως και 12 εβδομάδες.
Το υλικό λαμβάνεται από τον αυχενικό σωλήνα με χρήση ειδικής βούρτσας. Η διαδικασία είναι ανώδυνη και δεν ενέχει κίνδυνο για το μωρό. Συνήθως κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης, πραγματοποιείται ανάλυση για χλαμύδια με τη μέθοδο PCR, καθώς και για ουρεαπλάσμωση, μυκοπλάσμωση, κυτταρομεγαλοϊό, έρπητα, ιό θηλώματος. Ένα τέτοιο σύμπλεγμα εξετάσεων ονομάζεται PCR-6.
PCR για διάγνωση HIV
Λόγω του γεγονότος ότι η μέθοδος αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης είναι πολύ ευαίσθητη στις αλλαγές στο σώμα και στις συνθήκες της διάγνωσης, πολλοί παράγοντες μπορούν να επηρεάσουν το αποτέλεσμα. Επομένως, η ανάλυση PCR για τη μόλυνση από τον ιό HIV δεν είναι αξιόπιστη μέθοδος, η αποτελεσματικότητά της είναι 96–98%. Στο υπόλοιπο 2-4% των περιπτώσεων, το τεστ δίνει ψευδώς θετικά αποτελέσματα.
Αλλά σε ορισμένες περιπτώσεις, η διάγνωση HIV PCR είναι απαραίτητη. Συνήθως χορηγείται σε άτομα με ψευδώς αρνητικό αποτέλεσμα ELISA. Τέτοιοι δείκτες υποδεικνύουν ότι ένα άτομο δεν έχει αναπτύξει ακόμη αντισώματα έναντι του ιού και δεν μπορεί να ανιχνευθεί χωρίς πολλαπλή αύξηση του αριθμού. Αυτό ακριβώς μπορεί να επιτευχθεί με τη διενέργεια εξέτασης αίματος PCR.
Αυτές οι διαγνώσεις είναι επίσης απαραίτητες για παιδιά του πρώτου έτους της ζωής που γεννιούνται από οροθετική μητέρα. Η μέθοδος είναι ο μόνος τρόπος για τον αξιόπιστο προσδιορισμό της κατάστασης ενός παιδιού.
PCR για τη διάγνωση της ηπατίτιδας
Η μέθοδος αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης επιτρέπει την ανίχνευση του DNA του ιού της ηπατίτιδας A, B, C πολύ πριν από το σχηματισμό αντισωμάτων στη μόλυνση ή την εμφάνιση συμπτωμάτων της νόσου. Η ανάλυση PCR για την ηπατίτιδα C είναι ιδιαίτερα αποτελεσματική, καθώς στο 85% των περιπτώσεων αυτή η ασθένεια είναι ασυμπτωματική και χωρίςΗ έγκαιρη θεραπεία εισέρχεται στο χρόνιο στάδιο.
Η έγκαιρη ανίχνευση του παθογόνου θα βοηθήσει στην αποφυγή επιπλοκών και μακροχρόνια θεραπεία.
Ολοκληρωμένη εξέταση PCR
Σύνθετη ανάλυση PCR: τι είναι; Πρόκειται για εξέταση με τη μέθοδο της πολυμερικής αλυσιδωτής αντίδρασης, η οποία περιλαμβάνει ταυτόχρονο προσδιορισμό πολλών τύπων λοιμώξεων: mycoplasma genitalium, mycoplasma hominis, gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, κυτταρομεγαλοϊός, ureaplasma urealiticum, ερπητοϊός τύπου 1 και gonorrmaa2. Η τιμή τέτοιων διαγνωστικών κυμαίνεται από 2000 έως 3500 ρούβλια. ανάλογα με την κλινική, τα υλικά και τον εξοπλισμό που χρησιμοποιούνται, καθώς και με το είδος της ανάλυσης: ποιοτική ή ποσοτική. Τι είναι απαραίτητο στην περίπτωσή σας - ο γιατρός θα αποφασίσει. Σε ορισμένες περιπτώσεις, αρκεί μόνο να προσδιοριστεί η παρουσία του παθογόνου, σε άλλες, για παράδειγμα, με μόλυνση από HIV, ένας ποσοτικός τίτλος παίζει σημαντικό ρόλο. Κατά τη διάγνωση όλων των παραπάνω παθογόνων, η εξέταση ονομάζεται «ανάλυση PCR-12».
Μεταγραφή αποτελεσμάτων ανάλυσης
Η αποκρυπτογράφηση της ανάλυσης PCR δεν είναι δύσκολη. Υπάρχουν μόνο 2 κλίμακες του δείκτη - "θετικό αποτέλεσμα" και "αρνητικό αποτέλεσμα". Όταν ανιχνευτεί ένα παθογόνο, οι γιατροί μπορούν να επιβεβαιώσουν την παρουσία της νόσου με 99% βεβαιότητα και να ξεκινήσουν τη θεραπεία του ασθενούς. Με μια ποσοτική μέθοδο για τον προσδιορισμό της μόλυνσης, η αντίστοιχη στήλη θα υποδεικνύει τον αριθμητικό δείκτη των ανιχνευθέντων βακτηρίων. Μόνο ένας γιατρός μπορεί να προσδιορίσει την έκταση της νόσου και να συνταγογραφήσει την απαραίτητη θεραπεία.
Σε ορισμένες περιπτώσεις, για παράδειγμα, κατά τον προσδιορισμό της HIV λοίμωξης με PCR, με αρνητικό αποτέλεσμα, καθίσταται απαραίτητη η διενέργεια πρόσθετων εξετάσεων για την επιβεβαίωση των δεικτών που λήφθηκαν.
Πού να κάνετε το τεστ;
Πού να κάνετε μια εξέταση PCR: σε δημόσια κλινική ή σε ιδιωτικό εργαστήριο; Δυστυχώς, στα δημοτικά ιατρικά ιδρύματα, ο εξοπλισμός και οι μέθοδοι είναι συχνά ξεπερασμένες. Επομένως, είναι προτιμότερο να προτιμάτε ιδιωτικά εργαστήρια με σύγχρονο εξοπλισμό και υψηλά καταρτισμένο προσωπικό. Επιπλέον, σε μια ιδιωτική κλινική, θα έχετε αποτελέσματα πολύ πιο γρήγορα.
Στη Μόσχα, πολλά ιδιωτικά εργαστήρια προσφέρουν ανάλυση PCR για διάφορες λοιμώξεις. Για παράδειγμα, σε κλινικές όπως Vita, Complex Clinic, Happy Family, Uro-Pro, πραγματοποιείται ανάλυση PCR. Η τιμή της εξέτασης είναι από 200 ρούβλια. για τον εντοπισμό ενός παθογόνου.
Μπορεί να συναχθεί το συμπέρασμα ότι η διάγνωση μολυσματικών ασθενειών με PCR στις περισσότερες περιπτώσεις είναι ένας γρήγορος και αξιόπιστος τρόπος ανίχνευσης του παθογόνου στο σώμα στα αρχικά στάδια της μόλυνσης. Ωστόσο, σε ορισμένες περιπτώσεις, αξίζει να επιλέξετε άλλες διαγνωστικές μεθόδους. Μόνο ένας ειδικός μπορεί να καθορίσει την ανάγκη για μια τέτοια μελέτη. Η αποκρυπτογράφηση της ανάλυσης PCR απαιτεί επίσης επαγγελματική προσέγγιση. Ακολουθήστε τις συμβουλές του γιατρού σας και μην κάνετε εξετάσεις που δεν χρειάζεστε.
