Ηπατίτιδα C είναι μια λοίμωξη του ήπατος που προκαλείται από τον ιό Flaviviridae HCV, ο οποίος αποτελείται από ένα ή περισσότερα μόρια RNA. Κατά κανόνα, λαμβάνεται μια σειρά από διαγνωστικά μέτρα για τη διαπίστωση της ηπατίτιδας C σε έναν ασθενή. Η PCR είναι μια ανάλυση που επιβεβαιώνει με ακρίβεια τη διάγνωση. Συχνά το συμπέρασμα παρέχεται από τους γιατρούς όταν ο ασθενής έχει ήδη τα πρώτα σημάδια της νόσου.
Τι είναι ηπατίτιδα C
Η ηπατική βλάβη από μια ιογενή λοίμωξη που μεταδίδεται μέσω αίματος ή σεξουαλικής επαφής ονομάζεται στην ιατρική ηπατίτιδα C. Ο αιτιολογικός παράγοντας είναι ένας ιός που περιέχει RNA μη κυτταρικών μολυσματικών παραγόντων της οικογένειας Flaviviridae. Η μόλυνση μπορεί να παραμείνει στο σώμα για μεγάλο χρονικό διάστημα χωρίς να εμφανίζεται. Επομένως, μόνο όταν ανιχνεύεται ένας μικροοργανισμός χρησιμοποιώντας μια εξέταση αίματος χρησιμοποιώντας PCR RNA RNA, η ηπατίτιδα C (ως διάγνωση) θεωρείται δικαιολογημένη.
Ο φλαβιός δεν παράγεται σε τεχνητά αναπτυγμένα απομονωμένα κύτταρα. Στη διαδικασία της αναπαραγωγής, ο μολυσματικός παράγοντας δημιουργεί ανοσολογικά διακριτές τροποποιήσεις. Αυτοί οι παράγοντες εμποδίζουν το σώμα να δώσεικατάλληλη προστατευτική απόκριση και οι ειδικοί δυσκολεύονται να αναπτύξουν ένα αποτελεσματικό εμβόλιο.
Ο ιός μεταδίδεται παρεντερικά. Για μόλυνση, πρέπει να εισέλθει σε επαρκείς ποσότητες απευθείας στην κυκλοφορία του αίματος.
Τι εξετάσεις γίνονται για την ηπατίτιδα C
Οι ιογενείς παθολογίες του ήπατος διαγιγνώσκονται χρησιμοποιώντας εργαστηριακές εξετάσεις. Οι κλινικές μελέτες της ηπατίτιδας C πραγματοποιούνται με τη μελέτη ξένων και επικίνδυνων αντιγόνων ή πρωτεϊνικών ενώσεων (αντισωμάτων) στο βιοϋλικό του ασθενούς, κυρίως στο αίμα.
- Ενζυματική ανοσοδοκιμασία (ELISA). Η μέθοδος βασίζεται στην ανίχνευση αντισωμάτων lgM στο αίμα. Η ανοσοσφαιρίνη θεωρείται η μεγαλύτερη και είναι πενταμερές. Εκδηλώνεται στην πρωτογενή προστατευτική απόκριση των λεμφοκυττάρων σε μια άγνωστη ξένη ουσία.
- Radioimmunoassay (RIA) - ποσοτικός προσδιορισμός της lgM ανοσοσφαιρίνης χρησιμοποιώντας ένα επισημασμένο ραδιενεργό ισότοπο ιωδίου.
- PCR της ηπατίτιδας C - προσδιορισμός του ιικού RNA στο βιοϋλικό (αίμα). Αυτή η ανάλυση επιβεβαιώνει αξιόπιστα τη διάγνωση.
Ο έλεγχος IgG δεν είναι αξιόπιστος. Η παρουσία του στον ορό του αίματος μπορεί να υποδηλώνει όχι μόνο την παρουσία ενός φλαβοϊού, αλλά και άλλης προηγούμενης λοίμωξης που έχει το ίδιο παθογόνο.
Τι καθορίζει την ανάλυση PCR
Αλυσωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) βασίζεται στην αναγνώριση περιοχών DNA ειδικών για ορισμένα παθογόνα σε δείγματα υλικού για έρευνα (επιθήλιο, αίμα). Η ανάλυση καθιστά δυνατό τον εντοπισμό των μικρότερων παθογόνων οργανισμών (ιών) ανιχνεύοντας το RNA ή το DNA τους σε βιολογικό υλικό.
Η εργαστηριακή διαδικασία για την ανίχνευση αντισωμάτων PCR ηπατίτιδας C πραγματοποιείται σε 3 στάδια:
- Επιλέξτε. Το βιοϋλικό που μελετήθηκε καθαρίζεται από ακαθαρσίες και λαμβάνεται DNA στην κινητή φάση της χρωματογραφικής στήλης.
- Ενίσχυση. Η ανάλυση πραγματοποιείται στον κυκλοποιητή συσκευής-θερμοστάτη. Θερμαίνει και ψύχει τους δοκιμαστικούς σωλήνες με μια ορισμένη κυκλικότητα. Για μία μελέτη, πραγματοποιούνται έως και 35 κύκλοι. Το αποτέλεσμα είναι επαρκής αριθμός θραυσμάτων DNA για τον εντοπισμό, τον εντοπισμό και την αξιολόγηση του παθογόνου.
- Ηλεκτροφόρηση. Τα προκύπτοντα θραύσματα τοποθετούνται σε γέλη με διαφορετικό κορεσμό αγαρόζης και πραγματοποιείται ηλεκτροφόρηση. Το ηλεκτροφερόγραμμα που προκύπτει αναλύεται σε υπολογιστή.
Δεν χρησιμοποιείται μόνο η τυπική μελέτη PCR, αλλά και η ανάλυση PCR σε πραγματικό χρόνο. Αυτό είναι διαγνωστικό σε πραγματικό χρόνο. Η μέθοδος επιτρέπει ποιοτική και ποσοτική ανάλυση, η οποία καθιστά δυνατό τον εντοπισμό του σχηματισμού και της δυναμικής της νόσου, καθώς και τη συνταγογράφηση θεραπείας που στοχεύει στην εξάλειψη της αιτίας της προέλευσης της παθολογίας. Η PCR σε πραγματικό χρόνο χρησιμοποιείται επίσης για τον προσδιορισμό μιας καθαρής καλλιέργειας μολυσματικών παραγόντων (γονότυπος).
Πώς γίνεται η δοκιμή αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης
Για διάγνωση, μπορεί να χρησιμοποιηθεί οποιοδήποτε ανθρώπινο βιολογικό υγρό. Το βιοϋλικό για τον έλεγχο της ηπατίτιδας C είναι συνήθως αίμα.
Η δειγματοληψία για διαγνωστικά πραγματοποιείται στο διαδικαστικόγραφείο. Για τη λήψη αίματος, χρησιμοποιήστε δοκιμαστικούς σωλήνες μιας χρήσης με ουσία που αναστέλλει την πήξη του αίματος. Οι δραστηριότητες που επικεντρώνονται στην πρόληψη της εξάπλωσης μολυσματικών παραγόντων βοηθούν στην αποφυγή της εισόδου ενός άλλου στελέχους μικροοργανισμών από το εξωτερικό.
Αίμα για PCR της ηπατίτιδας C λαμβάνεται το πρωί με άδειο στομάχι. Το δείγμα αποστέλλεται αμέσως στο εργαστήριο. Επιτρέπεται η αποθήκευση του βιοϋλικού σε θερμοκρασία από +4 έως +8 βαθμούς Κελσίου. Τα δοχεία φέρουν ετικέτα και παρέχονται οδηγίες. Τα αποτελέσματα των δοκιμών είναι διαθέσιμα εντός 48 ωρών, μερικές φορές νωρίτερα.
Τύποι PCR
Το εύρος εφαρμογής της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης είναι αρκετά ευρύ. Οι λοιμωξιολόγοι καθορίζουν χρησιμοποιώντας PCR ηπατίτιδα Β, ασθένειες που μεταδίδονται από έντομα που ρουφούν το αίμα, AIDS, φυματίωση. Στην ογκολογία, χρησιμοποιώντας αυτή τη μέθοδο, τα καρκινικά κύτταρα ανιχνεύονται σε πρώιμο στάδιο.
Υπάρχουν περίπου δεκατέσσερις τύποι ανάλυσης. Η χρήση του ενός ή του άλλου τύπου εξαρτάται από το εύρος και τα τελικά αποτελέσματα των αναλύσεων. Ορισμένοι τύποι PCR είναι απαραίτητοι όταν το αποτέλεσμα απαιτείται μέσα σε 20 λεπτά.
Για τη διάγνωση της ηπατίτιδας C, χρησιμοποιούνται 3 τύποι αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης:
- Η ποιοτική αξιολόγηση μπορεί να είναι είτε θετική, υποδεικνύοντας την παρουσία μόλυνσης στο σώμα, είτε αρνητική, υποδηλώνοντας την απουσία φλαβοϊού.
- PCR σε πραγματικό χρόνο (ποσοτική ανάλυση) - προσδιορίζει το ποσοτικό RNA του παθογόνου σε IU/ml.
- Ο γονότυπος είναι μια ανάλυση που αποκαλύπτει τον τύπο (γονότυπο) του ιού.
Για τον ακριβή εντοπισμό και τον προσδιορισμό της νόσου, ακολουθούμενη απόΚαι οι τρεις τύποι μελετών χρησιμοποιούνται για τη συνταγογράφηση της βέλτιστης θεραπείας.
Ποιοτική ανάλυση αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης
Η ανάλυση είναι υποχρεωτική για όλους όσους έχουν ELISA που έχουν ανιχνεύσει αντισώματα κατά του HCV. Η ποιοτική PCR για την ηπατίτιδα C είναι η τυπική δοκιμή ευαισθησίας. Η μέθοδος στοχεύει μόνο στην ανίχνευση, δεν πραγματοποιείται καταμέτρηση ή απομόνωση άλλων ουσιών.
Για την ανίχνευση αντισωμάτων, χρησιμοποιούνται ειδικά συστήματα δοκιμών με ουδό ευαισθησίας τουλάχιστον 50 IU/ml. Εάν εντοπιστούν αντισώματα, συνταγογραφούνται άλλες διευκρινιστικές εξετάσεις. Εάν το αποτέλεσμα είναι αρνητικό, δεν θα γίνει περαιτέρω δοκιμή.
Σε ορισμένες περιπτώσεις, ένα ψευδώς αρνητικό αποτέλεσμα μπορεί να οφείλεται σε ανίκανο προσωπικό του εργαστηρίου ή σε αντιδραστήρια κακής ποιότητας. Για ασφάλιση, είναι καλύτερα να ξανακάνετε την ανάλυση αλλού.
Ποσοτική PCR
Η μέθοδος χρησιμοποιείται για την άμεση μελέτη του αριθμού των φλαβοϊών σε έναν κύκλο αντίδρασης. Για ακριβή μέτρηση, χρησιμοποιούνται θραύσματα DNA που χρησιμοποιούνται για υβριδισμό ή επισημασμένοι με φθορισμό εκκινητές. Υπάρχει μια οικονομική επιλογή ανίχνευσης χρησιμοποιώντας τη βαφή SYBL Green. Η βαφή σφηνώνεται σε μια μικρή αυλάκωση στο DNA και γίνεται μπλε όταν ακτινοβοληθεί με λέιζερ.
Η συγκέντρωση προσδιορίζεται από τη συσκευή-ενισχυτή σε ψηφιακό ισοδύναμο. Οι τιμές μπορεί να διαφέρουν ελαφρώς μεταξύ των εργαστηρίων και επομένως θα πρέπει να συγκρίνονται με τις τιμές αναφοράς.
Ποσοτική PCRΗ ηπατίτιδα C βοηθά στην επιλογή της βέλτιστης δόσης των φαρμάκων και στον καθορισμό της διάρκειας της θεραπείας. Η συχνότητα της μελέτης εξαρτάται από το στάδιο της νόσου, τον τύπο του γονότυπου και τη συνταγογραφούμενη πορεία θεραπείας.
Προσδιορισμός γονότυπου
Ο ιός της ηπατίτιδας C έχει ποικίλη γενετική σύνθεση. Οι πολυάριθμες τροποποιήσεις καθιστούν αδύνατη τη δημιουργία ενός εμβολίου και επίσης περιπλέκουν τη θεραπεία. Συνολικά έχουν ταυτοποιηθεί και καταγραφεί 11 γονότυποι και 100 υποτύποι. Στις χώρες της πρώην ΕΣΣΔ, σε άτομα που έχουν μολυνθεί από ηπατίτιδα C, η PCR ανιχνεύει κυρίως τους γονότυπους 1b και 3.
Υπό την παρουσία οποιουδήποτε από τους γονότυπους, η κίρρωση ή ο καρκίνος του ήπατος μπορεί να ξεκαρδιστεί. Γι' αυτό είναι τόσο σημαντικό να ανιχνεύσουμε τον ιό έγκαιρα.
Για ορισμένους ασθενείς, ορισμένα φάρμακα που έχουν σχεδιαστεί για την καταπολέμηση του HCV είναι τοξικά. Ο γονότυπος σάς επιτρέπει να προσδιορίσετε τον τύπο της πρωτεΐνης και να συνταγογραφήσετε ένα αποτελεσματικό φάρμακο.
Στα αποτελέσματα των δοκιμών πληκτρολόγησης υπάρχει ένας αριθμός με πεζό λατινικό γράμμα που υποδεικνύει τον γονότυπο του ιού. Εάν ανιχνευτεί HCV αλλά δεν πληκτρολογηθεί, αυτό σημαίνει ότι το άτομο έχει γονότυπο που δεν είναι τυπικός για μια συγκεκριμένη γεωγραφική περιοχή.
Αποτελέσματα ανάλυσης
Ο γιατρός ασχολείται με την αποκρυπτογράφηση των αποτελεσμάτων. Μόνο δεδομένα από πολλές μελέτες (μαζί με το ιστορικό και την εξέταση) μπορούν να δώσουν μια συνολική πραγματική εικόνα του ιατρικού ιστορικού.
- Σε ένα υγιές άτομο, μια δοκιμή για ποιοτική αντίδραση στο βιοϋλικό δεν ανιχνεύει τίποτα. Εάν υποδεικνύεται η τιμή "ανιχνεύθηκε", επιβεβαιώνεται η μόλυνση και ο ασθενήςχρειάζεται περαιτέρω διάγνωση ακολουθούμενη από θεραπεία.
- Ο προσδιορισμός του αριθμού των μολυσματικών παραγόντων καθιστά δυνατή την εκτίμηση του ιικού φορτίου στο σώμα. Κανονικά, η ποσοτική PCR της ηπατίτιδας C δεν ανιχνεύει το παθογόνο. Ένας δείκτης έως και 810^5 θεωρείται ως χαμηλό φορτίο και, με την κατάλληλη θεραπεία, εγγυάται ένα ευνοϊκό αποτέλεσμα. Οι υψηλότερες τιμές απαιτούν εις βάθος εξέταση και καθορισμό μακροχρόνιας θεραπείας, για το θετικό αποτέλεσμα της οποίας κανείς δεν μπορεί να εγγυηθεί.
- Τα θετικά αποτελέσματα γονότυπου υποδεικνύουν ποιος γονότυπος αναγνωρίζεται. Ένα αρνητικό αποτέλεσμα υποδηλώνει είτε την απουσία ενός φλαβοϊού είτε την παρουσία ενός γονότυπου που δεν είναι τυπικός για αυτήν την περιοχή.
Τι δείχνει ένα θετικό τεστ PCR
Οποιαδήποτε σοβαρή ασθένεια απαιτεί ολοκληρωμένη διάγνωση. Μια θετική PCR ηπατίτιδας C επιβεβαιώνει τη διάγνωση, αλλά οι προβλέψεις μπορούν να γίνουν μόνο μετά από πρόσθετες εργαστηριακές και ενόργανες μελέτες.
Η ανίχνευση ιού δεν δίνει πλήρη εικόνα της παθολογίας. Είναι απαραίτητο να προσδιοριστεί ο τύπος και η φύση του, να προσδιοριστεί πώς επηρεάζει το ήπαρ και άλλα όργανα. Η πρώιμη ανίχνευση του HCV έχει συχνά ευνοϊκό θεραπευτικό αποτέλεσμα.
Αρνητική PCR με θετικό ELISA
Όταν παρατηρούνται τα συμπτώματα που είναι χαρακτηριστικά της ηπατικής βλάβης, υπάρχει μεγάλη πιθανότητα η μόλυνση να έχει ήδη εισέλθει στον οργανισμό. Επομένως, θα πρέπει να επικοινωνήσετε με έναν ηπατολόγο ή έναν ειδικό λοιμωξιολόγο. Κατά τη διάρκεια των συνεντεύξεων, ο ειδικός θα συλλέξει ένα ιστορικό και θα συνταγογραφήσει την απαραίτητη εξέταση.
Αντα αποτελέσματα των μελετών για την PCR της ηπατίτιδας C είναι αρνητικά και η ενζυμική ανοσοδοκιμασία είναι θετική, αυτό δείχνει την παρουσία αντισωμάτων στον φλαβοϊό στο αίμα. Αυτό συμβαίνει συνήθως όταν η μόλυνση εισέρχεται στο σώμα σε μικρή ποσότητα, οπότε το ανοσοποιητικό σύστημα την αντιμετώπισε από μόνο του. Όμως τέτοιοι άνθρωποι εξακολουθούν να θεωρούνται μολυσμένοι και απαιτείται να εξετάζονται κάθε 6 μήνες. Εάν, με τέτοια αποτελέσματα εξετάσεων, ένα άτομο αρνηθεί τη δωρεάν ιατρική εξέταση, είναι προτιμότερο να κάνει PCR έναντι αμοιβής για να διατηρήσει την υγεία του και εάν τα αποτελέσματα είναι θετικά, επικοινωνήστε με έναν ειδικό για διάγνωση και θεραπεία.
Πλεονεκτήματα και μειονεκτήματα της μεθόδου
Όταν τίθεται η διάγνωση της ηπατίτιδας C, η PCR έχει πολλά πλεονεκτήματα:
- Πρώιμη ανίχνευση παθογόνου.
- Ακριβής ορισμός του ιού.
- Αποτελεσματικότητα των διαγνωστικών.
- Ελάχιστο ποσοστό σφάλματος.
- Υψηλή ευαισθησία.
Μειονεκτήματα της μεθόδου:
- Υψηλό κόστος ανάλυσης. Η δοκιμή απαιτεί ακριβό εξοπλισμό, αντιδραστήρια και υψηλά καταρτισμένο ιατρικό προσωπικό. Όλα μαζί αθροίζονται σε ένα σημαντικό ποσό.
- Αυστηρές απαιτήσεις για τη μεταφορά βιοϋλικού.
Θεραπεία της φλεγμονής του ήπατος
Η ανάλυση PCR για τον ιό της ηπατίτιδας C θεωρείται θεμελιώδης για τη διάγνωση, αλλά όχι οριστική. Για να είναι αποτελεσματική η θεραπεία, απαιτούνται πρόσθετες εργαστηριακές και οργανικές μελέτες. Αφού πέρασε όλαδιαγνωστικά μέτρα που συνταγογραφεί ο γιατρός θεραπεία:
- Η δίαιτα 5 συνταγογραφείται.
- Το αλκοόλ αποκλείεται εντελώς.
- Κοινή λήψη ιντερφερόνης και ριμπαβιρίνης για 25 ημέρες.
- Μαθήματα ηπαπροστατευτικών "Essentiale", "Karsil", "Phosphogliv".
- Σε ειδικές περιπτώσεις, χρησιμοποιείται διακριτή πλασμαφαίρεση.
Τα φάρμακα που συνταγογραφούνται από ηπατολόγο χρησιμοποιούνται τακτικά, χωρίς αλλαγή της δοσολογίας. Η διάρκεια λήψης των φαρμάκων καθορίζεται από τον γιατρό αφού περάσει τις δοκιμασίες ελέγχου. Μετά την ολοκλήρωση της θεραπείας, πρέπει να επισκέπτεστε το γιατρό κάθε έξι μήνες.
Η Διαγνωστική PCR επιτρέπει τον εντοπισμό του αιτιολογικού παράγοντα της ηπατίτιδας C σε πρώιμο στάδιο. Αυτό συμβάλλει στην αποτελεσματικότητα της θεραπείας και στην πρόληψη της μετάβασης της νόσου σε επικίνδυνες μορφές όπως η κίρρωση και το ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα.
