Χρωματομετρική μέθοδος - μια ανάλυση που βασίζεται σε σύγκριση του κορεσμού χρώματος των ερευνηθέντων και γνωστών ουσιών. Τα αποτελέσματα των φυσικών και χημικών δοκιμών έχουν μεγάλη αξία για πολλούς κλάδους της επιστήμης, αλλά κυρίως η έρευνα χρησιμοποιείται στην ιατρική.
Η ουσία της χρωματομετρικής μεθόδου
Υπάρχουν πολλοί τύποι δοκιμών που καθορίζουν τη χημική σύνθεση των ουσιών. Μερικά από αυτά είναι καθολικά και χρησιμοποιούνται ευρέως σε διάφορους τομείς, άλλα είναι συγκεκριμένα, με μεγαλύτερη ακρίβεια. Η χρωματομετρική μέθοδος είναι καθολική.
Η ουσία της ανάλυσης έγκειται στο γεγονός ότι ο κορεσμός χρώματος ενός διαλύματος με άγνωστη συγκέντρωση συγκρίνεται με το χρώμα ενός τυπικού διαλύματος. Κατά την ανάλυση, ως αποτέλεσμα της αλληλεπίδρασης του εξεταζόμενου συστατικού με ένα συγκεκριμένο αντιδραστήριο, σχηματίζεται μια έγχρωμη ένωση. Μετά την ολοκλήρωση της αντίδρασης, η απόχρωση που προκύπτει συγκρίνεται με το χρώμα των διαλυμάτων, η συγκέντρωση των οποίων είναι ήδη γνωστή.
Πιστεύεται ότι ο ιδρυτής της χρωματομετρίας είναι ο Robert Boyle. Χρησιμοποίησε συμπίεσητανίνες για τη διάκριση του σιδήρου από τον χαλκό στο διάλυμα. Ήταν ο Boyle που παρατήρησε ότι όσο μεγαλύτερη ήταν η συγκέντρωση του σιδήρου στο διάλυμα, τόσο πιο πλούσιος ήταν ο τόνος του τελευταίου.
Χρωματομετρία
Χρωματομετρία είναι μια μέθοδος για τον προσδιορισμό της ποσότητας μιας ουσίας σε διαλύματα. Η ανάλυση βασίζεται στον νόμο Bouguer-Lambert-Beer: όταν μια δέσμη φωτός χτυπά ένα πυκνό απορροφητικό στρώμα μιας ουσίας, η έντασή της εξασθενεί.
Η χρωματομετρική μέθοδος για τον προσδιορισμό της συγκέντρωσης μιας ουσίας μπορεί να χρησιμοποιήσει μια οπτική σύγκριση ή σύγκριση χρησιμοποιώντας ειδικά όργανα για τη μέτρηση της έντασης του χρώματος. Η σύγκριση γίνεται με άμεσο και αντισταθμιστικό τρόπο.
- Κατευθείαν. Η μέθοδος περιλαμβάνει τη σύγκριση του επιπέδου χρώματος του διαλύματος δοκιμής σε μια ορισμένη πυκνότητα και θερμοκρασία του υγρού με ένα διάλυμα αναφοράς. Όταν χρησιμοποιούνται φωτοχρωμόμετρα και φασματοφωτόμετρα, ως διάλυμα αναφοράς χρησιμοποιείται απεσταγμένο νερό. Οι συσκευές μετρούν την ένταση του ρεύματος, η οποία εξαρτάται από την ένταση του φωτός.
- Αντισταθμιστικό. Η μέθοδος βασίζεται στο να φέρει το χρώμα του δείγματος που μελετήθηκε στο δείγμα αναφοράς. Το αποτέλεσμα επιτυγχάνεται με την προσθήκη ενός διαλύτη ή την αύξηση του ύψους της στρώσης του λεκιασμένου μέσου.
Η χρήση φασματοφωτόμετρου, μονοχρωμάτορα και άλλων οργάνων ακριβείας απλοποιεί περαιτέρω την ήδη απλή μέθοδο έρευνας και σας επιτρέπει να αυξήσετε την ακρίβεια των αποτελεσμάτων. Αυτές οι συσκευές μπορούν να μετρήσουν την ποσότητα της μετάδοσης του φωτός και να προσδιορίσουν το μήκος κύματος.
Πού εφαρμόζεται η ανάλυση
Χρωματομετρική μέθοδος ανάλυσης χρησιμοποιείται όταν είναι γνωστή η ακριβής χημική σύνθεση, υπάρχει δείγμα αναφοράς για σύγκριση και η θερμοκρασία του δείγματος δοκιμής και του δείγματος αναφοράς είναι η ίδια. Εάν πρέπει να προσδιορίσετε γρήγορα την ποσότητα μιας έγχρωμης ουσίας, αλλά είναι τόσο μικρή που είναι αδύνατο να εφαρμόσετε την αναλυτική μέθοδο.
Η χρωματομέτρηση χρησιμοποιείται ευρέως στην ιατρική για κλινική βιοχημική έρευνα και άλλους τομείς:
- φαρμακευτική βιομηχανία;
- βιομηχανία τροφίμων και αλκοόλ;
- agronomy (προσδιορισμός της ποιότητας του εδάφους).
Πλεονεκτήματα και μειονεκτήματα
Η χρωματομετρική μέθοδος, όπως κάθε άλλη, έχει πλεονεκτήματα και μειονεκτήματα.
Τα πλεονεκτήματα περιλαμβάνουν τα ακόλουθα:
- ευκολία ανάλυσης, ελάχιστες προπαρασκευαστικές διαδικασίες;
- δυνατότητα δοκιμής ακόμη και με μικρή ποσότητα δοκιμαστικού υλικού;
- δεν χρειάζεται ακριβός εξοπλισμός, αν και σύγχρονες συσκευές που δεν είναι φθηνές χρησιμοποιούνται όλο και περισσότερο τελευταία. Αλλά παρέχουν το πιο ακριβές αποτέλεσμα.
Μειονεκτήματα: χαμηλή ακρίβεια ανάλυσης σε σύγκριση με αναλυτικές μεθόδους.
Μέθοδος Biuret για προσδιορισμό πρωτεΐνης
Η πρωτεΐνη στον ορό του αίματος είναι ένας δείκτης που αντανακλά την κατάσταση της ομοιόστασης. Η αύξηση της συγκέντρωσης μιας μακρομοριακής ένωσης στο αίμα ονομάζεται υπερπρωτεϊναιμία, η χαμηλή περιεκτικότητα ονομάζεται υποπρωτεϊναιμία.
Πρωτεΐνες σεο ορός αίματος έχει διαφορετική σύνθεση, δομή, ιδιότητες, εκτελεί διαφορετικές λειτουργίες. Χωρίζονται σε ένζυμα, ορμόνες, ανοσοσφαιρίνες και άλλα. Όλες οι ομάδες πρωτεϊνών έχουν ορισμένα κοινά χαρακτηριστικά, βάσει των οποίων έχουν αναπτυχθεί μέθοδοι για τον προσδιορισμό των μακρομοριακών οργανικών ενώσεων σε βιολογικά υγρά.
Από όλες τις μεθόδους στην κλινική βιοχημεία, χρησιμοποιούνται συχνότερα χρωματομετρικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης. Είναι σχετικά φθηνά, κάτι που είναι σημαντικό για τους δημοσιονομικούς οργανισμούς. και είναι αρκετά απλά. Η πιο κοινή είναι η μέθοδος διουρίας. Η ουσία της μεθόδου: οι πρωτεΐνες σε αλκαλικό περιβάλλον αντιδρούν με θειικό χαλκό και σχηματίζουν μοβ ενώσεις. Η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη στο αίμα καθορίζεται από τον κορεσμό της χρώσης. Το βιοϋλικό για ανάλυση λαμβάνεται το πρωί με άδειο στομάχι.
Η ανάλυση είναι πολύ ακριβής, αλλά υπάρχουν παράγοντες που επηρεάζουν τη συγκέντρωση της πρωτεΐνης στο αίμα:
- σωματική δραστηριότητα λίγο πριν από τη δειγματοληψία βιοϋλικών;
- τελευταίες εβδομάδες εγκυμοσύνης και γαλουχίας;
- η χρήση των φαρμάκων Corticotropin, Miscleron, Clofibrate αυξάνει την περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη στο αίμα και η χρήση πυραζιναμίδης και οιστρογόνων - για μείωση της συγκέντρωσης.
- λάθος θέση χεριού κατά τη δειγματοληψία βιοϋλικών.
Προσδιορισμός σιδήρου
Η ποσότητα του σιδήρου στο αίμα είναι ένας από τους κύριους δείκτες στη διάγνωση διαφόρων ασθενειών. Η ουσία συγκεντρώνεται στην αιμοσφαιρίνη, η οποία εξασφαλίζει τη μεταφορά οξυγόνου στους ιστούς. Γιαπροσδιορισμός του σιδήρου με τη χρωματομετρική μέθοδο, τις περισσότερες φορές, ως κύριο αντιδραστήριο χρησιμοποιείται διάλυμα βαθοφαινανθρολίνης (0,02%). Βιοϋλικό - ορός χωρίς ίχνη αιμόλυσης.
Η ουσία της μεθόδου: η αλληλεπίδραση ιόντων σιδήρου και θειικής βαθοφαινανθρολίνης σχηματίζει ένα έγχρωμο σύμπλεγμα, ο κορεσμός του οποίου προσδιορίζεται φωτομετρικά. Για να ληφθεί ένα διαυγές διάλυμα, είναι απαραίτητο να ακολουθήσετε τους κανόνες για τη δειγματοληψία του βιοϋλικού, αλλά για να προσδιοριστούν με ακρίβεια οι οπτικές πυκνότητες των συμπλοκών σιδήρου-προσδέματος, ο σίδηρος απελευθερώνεται από την αιμοσφαιρίνη χρησιμοποιώντας υδροξυλαμίνη και απορρυπαντικά (θειικό δωδεκυλικό νάτριο). Το αποτέλεσμα της εξέτασης καθορίζει την παρουσία και τον βαθμό της παθολογίας. Η κανονική συγκέντρωση σιδήρου πρέπει να είναι:
- 14, 2 – 26,0 µmol/L (άνδρες);
- 10, 6- 21, 7 μmol/L (γυναίκες).
Η έλλειψη σιδήρου συνήθως σχετίζεται με απώλεια αίματος, ανεπαρκή διατροφική πρόσληψη ή κακή απορρόφηση από το γαστρεντερικό σωλήνα.
Τεστ χοληστερόλης
Η χοληστερόλη είναι μια οργανική ουσία που βρίσκεται στο κυτταρικό τοίχωμα πολλών οργανισμών, συμπεριλαμβανομένων των ανθρώπων. Είναι απαραίτητο για την παραγωγή χοληκαλσιφερόλης και στεροειδών ορμονών. Ένα επίπεδο χοληστερόλης 3,37-5,2 mmol/L θεωρείται φυσιολογικό. Η αυξημένη περιεκτικότητα είναι μία από τις κύριες αιτίες της αθηροσκλήρωσης.
Χρωματομετρικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό της χοληστερόλης σάς επιτρέπουν να αναγνωρίζετε τις αγγειακές παθήσεις σε πρώιμο στάδιο. Σύμφωνα με τα παθοανατομικά αποτελέσματα στη θανατηφόρα έκβαση της ισχαιμίας, η συγκέντρωση της λιπόφιλης αλκοόλης στους ασθενείςήταν 6,5-7,8 mmol/L.
Η αρχή της χρωματομετρικής μεθόδου είναι ότι η χοληστερόλη οξειδώνεται από 3βήτα-υδροξυ-στεροειδή οξειδορεδουκτάση, απελευθερώνοντας υπεροξείδιο του υδρογόνου, το οποίο μετατρέπει την π-αμινοατιπυρίνη σε έγχρωμη ένωση. Η περιεκτικότητα σε χοληστερόλη καθορίζεται από τον κορεσμό του χρώματός της.
Κατά τη διεξαγωγή μιας δοκιμής σε παιδί, πρέπει να λαμβάνεται υπόψη ότι η συγκέντρωση της χοληστερόλης στην παιδική ηλικία δεν πρέπει να υπερβαίνει τα 4,1 mmol / l.
Τι είναι η ενζυματική χρωματομετρική μέθοδος;
Οι ενζυματικές δοκιμές βασίζονται στη χρήση αντιδράσεων από ένζυμα με υψηλή δραστικότητα. Χρησιμοποιούνται ευρέως στην αναλυτική χημεία για τον προσδιορισμό διαφόρων ουσιών - από νιτρικά ιόντα έως μακρομόρια.
Οι ενζυματικές (ενζυματικές) μέθοδοι είναι συγκεκριμένες, που επιτρέπουν την ανάλυση ορισμένων ουσιών παρουσία άλλων ουσιών παρόμοιας σύνθεσης. Οι πιο κοινές μέθοδοι που βασίζονται στη χρήση του ενζύμου - οξειδάση γλυκόζης. Το τεστ χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της συγκέντρωσης γλυκόζης στο αίμα. Η ακρίβεια του τεστ επιτρέπει τη χρήση του για την προσαρμογή της δοσολογίας των υπογλυκαιμικών παραγόντων σε ασθενείς με διαβήτη τύπου 2.
Η μέθοδος οξειδωτικού γλυκόζης θεωρείται μία από τις καλύτερες ποσοτικές μεθόδους για τον προσδιορισμό της γλυκόζης. Τόσο το αίμα (τριχοειδή) όσο και ο ορός μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως βιοϋλικό, αλλά το πλάσμα είναι πιο προτιμότερο επειδή έχει χαμηλότερη περιεκτικότητα σε αιματοκρίτη, γεγονός που επηρεάζει αρνητικά την ακρίβεια του αποτελέσματος.
Χρησιμοποιείται κυρίως η κινητική μέθοδος της φωτομετρίας. Η ουσία του έγκειται στο γεγονός ότιη καθιερωμένη αναλογία οξειδάσης γλυκόζης και υπεροξειδάσης, για ορισμένο χρονικό διάστημα μετά την έναρξη της αντίδρασης, ο ρυθμός σχηματισμού μιας έγχρωμης ένωσης θα είναι ανάλογος με το επίπεδο γλυκόζης στο δείγμα. Το κύριο πλεονέκτημα της δοκιμής είναι ότι το αποτέλεσμα δεν επηρεάζεται από την παρουσία ενώσεων τρίτων στο δείγμα. Η μέθοδος έχει επίσης ένα μειονέκτημα - για τη δοκιμή απαιτούνται ακριβά όργανα μέτρησης από Γερμανούς ή Σουηδούς κατασκευαστές.
Συμπέρασμα
Η χρωματομετρική μέθοδος είναι ακριβής και εύκολη στη χρήση. Η χρήση του στην ιατρική επιτρέπει την έγκαιρη ανίχνευση διαφόρων παθολογικών αλλαγών στο σώμα. Με την εισαγωγή νέων τεχνολογιών, η μέθοδος βελτιώνεται και γίνεται όλο και πιο δημοφιλής.
