Η εργαστηριακή διάγνωση όλων σχεδόν των λοιμωδών νοσημάτων βασίζεται στην ανίχνευση αντισωμάτων στο αίμα του ασθενούς, τα οποία παράγονται έναντι των αντιγόνων του παθογόνου, με τις μεθόδους ορολογικών αντιδράσεων. Εισήλθαν στην ιατρική πρακτική από τα τέλη του δέκατου ένατου έως τις αρχές του εικοστού αιώνα.
Η ανάπτυξη της επιστήμης βοήθησε στον προσδιορισμό της αντιγονικής δομής των μικροβίων και των χημικών τύπων των τοξινών τους. Αυτό κατέστησε δυνατή τη δημιουργία όχι μόνο θεραπευτικών, αλλά και διαγνωστικών ορών. Λαμβάνονται με τη χορήγηση εξασθενημένων παθογόνων σε πειραματόζωα. Μετά από αρκετές ημέρες έκθεσης, το αίμα κουνελιών ή ποντικών χρησιμοποιείται για την παρασκευή σκευασμάτων που χρησιμοποιούνται για την αναγνώριση μικροβίων ή των τοξινών τους χρησιμοποιώντας ορολογικές εξετάσεις.
Η εξωτερική εκδήλωση μιας τέτοιας αντίδρασης εξαρτάται από τις συνθήκες της εμφάνισής της και από την κατάσταση των αντιγόνων στο αίμα του ασθενούς. Εάν τα μικροβιακά σωματίδια είναι αδιάλυτα, καθιζάνουν, λύονται, δεσμεύονται ή ακινητοποιούνται στον ορό. Εάν τα αντιγόνα είναι διαλυτά, τότε εμφανίζεται το φαινόμενο της εξουδετέρωσης ή της καθίζησης.
Αντίδραση συγκόλλησης (RA)
Το τεστ ορολογικής συγκόλλησης είναι εξαιρετικά εξειδικευμένο. Είναι εύκολο στην εκτέλεση και αρκετάοπτικά, για να προσδιοριστεί γρήγορα η παρουσία αντιγόνων στον ορό αίματος του ασθενούς. Χρησιμοποιείται για τον έλεγχο της αντίδρασης Vidal (διάγνωση τύφου και παρατυφοειδούς πυρετού) και Weigl (τύφος πυρετός).
Βασίζεται σε μια συγκεκριμένη αλληλεπίδραση μεταξύ ανθρώπινων αντισωμάτων (ή συγκολλητινών) και μικροβιακών κυττάρων (συγκολλητογόνα). Μετά την αλληλεπίδρασή τους, σχηματίζονται σωματίδια που κατακρημνίζονται. Αυτό είναι ένα θετικό σημάδι. Για τη ρύθμιση της αντίδρασης μπορούν να χρησιμοποιηθούν ζωντανοί ή νεκροί μικροβιακοί παράγοντες, μύκητες, πρωτόζωα, αιμοσφαίρια και σωματικά κύτταρα.
Χημικά, η αντίδραση χωρίζεται σε δύο στάδια:
- Ειδική σύνδεση αντισωμάτων (AT) με αντιγόνα (AG).
- Μη ειδική - κατακρήμνιση συσσωματωμάτων AG-AT, δηλαδή σχηματισμός συγκολλητικού.
Έμμεση αντίδραση συγκόλλησης (IPHA)
Αυτή η αντίδραση είναι πιο ευαίσθητη από την προηγούμενη. Χρησιμοποιείται για τη διάγνωση ασθενειών που προκαλούνται από βακτήρια, ενδοκυτταρικά παράσιτα και πρωτόζωα. Είναι τόσο συγκεκριμένο που μπορούν να ανιχνευθούν ακόμη και πολύ χαμηλές συγκεντρώσεις αντισωμάτων.
Καθαρισμένα ερυθροκύτταρα προβάτου και ανθρώπινα ερυθρά αιμοσφαίρια προεπεξεργασμένα με αντισώματα ή αντιγόνα χρησιμοποιούνται για την παραγωγή του (ανάλογα με το τι θέλει να βρει ο τεχνικός εργαστηρίου). Σε ορισμένες περιπτώσεις, τα ανθρώπινα ερυθρά αιμοσφαίρια αντιμετωπίζονται με ανοσοσφαιρίνες. Ορολογικές αντιδράσεις των ερυθροκυττάρων θεωρείται ότι έχουν λάβει χώρα εάν έχουν κατακαθίσει στον πυθμένα του σωλήνα. Σχετικά με μια θετική αντίδρασηας πούμε όταν τα κελιά είναι διατεταγμένα με τη μορφή ανεστραμμένης ομπρέλας, που καταλαμβάνει ολόκληρο τον πυθμένα. Μια αρνητική αντίδραση μετράται εάν τα ερυθροκύτταρα εγκατασταθούν σε μια στήλη ή με τη μορφή ενός κουμπιού στο κέντρο του πυθμένα.
αντίδραση καθίζησης (RP)
Ορολογικές αντιδράσεις αυτού του τύπου χρησιμοποιούνται για την ανίχνευση εξαιρετικά μικρών σωματιδίων αντιγόνων. Αυτά μπορεί να είναι, για παράδειγμα, πρωτεΐνες (ή μέρη τους), ενώσεις πρωτεϊνών με λιπίδια ή υδατάνθρακες, μέρη βακτηρίων, οι τοξίνες τους.
Οι οροί για την αντίδραση λαμβάνονται με τεχνητή μόλυνση ζώων, συνήθως κουνελιών. Με αυτή τη μέθοδο, μπορείτε να πάρετε απολύτως οποιονδήποτε ορό καθίζησης. Η ρύθμιση των αντιδράσεων ορολογικής καθίζησης είναι παρόμοια σε μηχανισμό δράσης με τις αντιδράσεις συγκόλλησης. Τα αντισώματα που περιέχονται στον ορό συνδυάζονται με αντιγόνα σε ένα κολλοειδές διάλυμα, σχηματίζοντας μεγάλα μόρια πρωτεΐνης που εναποτίθενται στον πυθμένα του σωλήνα ή στο υπόστρωμα (γέλη). Αυτή η μέθοδος θεωρείται εξαιρετικά ειδική και μπορεί να ανιχνεύσει ακόμη και αμελητέες ποσότητες μιας ουσίας.
Χρησιμοποιείται για τη διάγνωση πανώλης, τουλαραιμίας, άνθρακα, μηνιγγίτιδας και άλλων ασθενειών. Επιπλέον, εμπλέκεται σε ιατροδικαστική εξέταση.
Αντίδραση κατακρήμνισης γέλης
Ορολογικές αντιδράσεις μπορούν να πραγματοποιηθούν όχι μόνο σε υγρό μέσο, αλλά και σε γέλη άγαρ. Αυτό ονομάζεται μέθοδος διάχυτης καθίζησης. Με τη βοήθειά του μελετάται η σύνθεση πολύπλοκων αντιγονικών μιγμάτων. Αυτή η μέθοδος βασίζεται στη χημειοταξία των αντιγόνων στα αντισώματα και αντίστροφα. Σε ένα τζελ κινούνταιτο ένα προς το άλλο με διαφορετικές ταχύτητες και, συναντώντας, σχηματίζουν γραμμές βροχόπτωσης. Κάθε γραμμή είναι ένα σετ AG-AT.
Αντίδραση εξουδετέρωσης εξωτοξίνης με αντιτοξίνη (PH)
Οι αντιτοξικοί οροί είναι σε θέση να εξουδετερώσουν τη δράση της εξωτοξίνης που παράγεται από μικροοργανισμούς. Αυτές οι ορολογικές αντιδράσεις βασίζονται σε αυτό. Η μικροβιολογία χρησιμοποιεί αυτή τη μέθοδο για να τιτλοδοτήσει ορούς, τοξίνες και τοξοειδή και να καθορίσει τη θεραπευτική τους δράση. Η ισχύς της εξουδετέρωσης των τοξινών καθορίζεται από συμβατικές μονάδες - AE.
Επιπλέον, χάρη σε αυτή την αντίδραση, είναι δυνατός ο προσδιορισμός του είδους ή του τύπου της εξωτοξίνης. Αυτό χρησιμοποιείται στη διάγνωση του τετάνου, της διφθερίτιδας, της αλλαντίασης. Η μελέτη μπορεί να πραγματοποιηθεί τόσο σε γυαλί όσο και σε gel.
Αντίδραση λύσης (RL)
Ο ανοσοποιητικός ορός, που εισέρχεται στο σώμα του ασθενούς, έχει, εκτός από την κύρια λειτουργία του παθητικού ανοσίας, και ιδιότητες λύσης. Είναι σε θέση να διαλύει μικροβιακούς παράγοντες, κυτταρικά ξένα στοιχεία και ιούς που εισέρχονται στο σώμα του ασθενούς. Ανάλογα με την ειδικότητα των αντισωμάτων που περιλαμβάνονται στον ορό, απομονώνονται οι βακτηριολυσίνες, οι κυτολυσίνες, οι σπειροχετολιζίνες, οι αιμολυσίνες και άλλες.
Αυτά τα συγκεκριμένα αντισώματα ονομάζονται «συμπλήρωμα». Βρίσκεται σχεδόν σε όλα τα υγρά του ανθρώπινου σώματος, έχει πολύπλοκη δομή πρωτεΐνης και είναι εξαιρετικά ευαίσθητο στην άνοδο της θερμοκρασίας, το κούνημα, τα οξέα και το άμεσο ηλιακό φως. Αλλά σε αποξηραμένη κατάσταση είναι σε θέση να διατηρήσειΟι λυτικές του ιδιότητες έως και έξι μήνες.
Υπάρχουν αυτοί οι τύποι ορολογικών αντιδράσεων αυτού του τύπου:
- βακτηριόλυση;
- αιμόλυση.
Η βακτηριόλυση πραγματοποιείται με τη χρήση ορού αίματος του ασθενούς και συγκεκριμένου ανοσοποιητικού ορού με ζωντανά μικρόβια. Εάν υπάρχει αρκετό συμπλήρωμα στο αίμα, τότε ο ερευνητής θα δει τα βακτήρια να λύονται και η αντίδραση θα θεωρηθεί θετική.
Η δεύτερη ορολογική αντίδραση του αίματος είναι ότι ένα εναιώρημα των ερυθρών αιμοσφαιρίων του ασθενούς αντιμετωπίζεται με ορό που περιέχει αιμολυσίνες, οι οποίες ενεργοποιούνται μόνο με την παρουσία ενός συγκεκριμένου κομπλιμέντου. Εάν υπάρχει, τότε ο εργαστηριακός βοηθός παρατηρεί τη διάλυση των ερυθρών αιμοσφαιρίων. Αυτή η αντίδραση χρησιμοποιείται ευρέως στη σύγχρονη ιατρική για τον προσδιορισμό του τίτλου του συμπληρώματος (δηλαδή της μικρότερης ποσότητας του που προκαλεί λύση ερυθροκυττάρων) στον ορό του αίματος και για τη διεξαγωγή ανάλυσης για στερέωση του συμπληρώματος. Με αυτόν τον τρόπο πραγματοποιείται μια ορολογική εξέταση για σύφιλη - η αντίδραση Wasserman.
Αντίδραση στερέωσης συμπληρώματος (CFR)
Αυτή η αντίδραση χρησιμοποιείται για την ανίχνευση αντισωμάτων σε έναν μολυσματικό παράγοντα στον ορό αίματος του ασθενούς, καθώς και για την αναγνώριση του παθογόνου από την αντιγονική του δομή.
Μέχρι αυτό το σημείο, έχουμε περιγράψει απλές ορολογικές αντιδράσεις. Το RSK θεωρείται μια πολύπλοκη αντίδραση, αφού όχι δύο, αλλά τρία στοιχεία αλληλεπιδρούν σε αυτό: αντίσωμα, αντιγόνο και συμπλήρωμα. Η ουσία του έγκειται στο γεγονός ότι η αλληλεπίδραση μεταξύ του αντισώματος και του αντιγόνουεμφανίζεται μόνο παρουσία πρωτεϊνών συμπληρώματος, οι οποίες απορροφώνται στην επιφάνεια του σχηματιζόμενου συμπλόκου AG-AT.
Τα ίδια τα αντιγόνα, μετά την προσθήκη συμπληρώματος, υφίστανται σημαντικές αλλαγές, που δείχνουν την ποιότητα της αντίδρασης. Μπορεί να είναι λύση, αιμόλυση, ακινητοποίηση, βακτηριοκτόνος ή βακτηριοστατική δράση.
Η ίδια η αντίδραση λαμβάνει χώρα σε δύο φάσεις:
- Σχηματισμός συμπλόκου αντιγόνου-αντισώματος που δεν είναι ορατό οπτικά στον εξεταστή.
- Αλλαγή στο αντιγόνο υπό τη δράση του συμπληρώματος. Αυτή η φάση μπορεί τις περισσότερες φορές να εντοπιστεί με γυμνό μάτι. Εάν η αντίδραση δεν είναι ορατή οπτικά, τότε χρησιμοποιείται ένα πρόσθετο σύστημα ένδειξης για τον εντοπισμό αλλαγών.
Σύστημα ενδείξεων
Αυτή η αντίδραση βασίζεται στη στερέωση του συμπληρώματος. Καθαρισμένα ερυθροκύτταρα κριαριού και αιμολυτικός ορός χωρίς συμπλήρωμα προστίθενται στον δοκιμαστικό σωλήνα μία ώρα μετά τη ρύθμιση του RSC. Εάν ένα μη δεσμευμένο συμπλήρωμα παραμείνει στον δοκιμαστικό σωλήνα, τότε θα ενώσει το σύμπλεγμα AG-AT που σχηματίζεται μεταξύ των κυττάρων του αίματος προβάτου και της αιμολυσίνης και θα προκαλέσει τη διάλυσή τους. Αυτό θα σημαίνει ότι το RSK είναι αρνητικό. Εάν τα ερυθροκύτταρα παρέμειναν άθικτα, τότε, κατά συνέπεια, η αντίδραση είναι θετική.
Δοκιμασία αιμοσυγκόλλησης (RGA)
Υπάρχουν δύο θεμελιωδώς διαφορετικές αντιδράσεις αιμοσυγκόλλησης. Ένα από αυτά είναι ορολογικό, χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό των ομάδων αίματος. Σε αυτή την περίπτωση, τα ερυθρά αιμοσφαίρια αλληλεπιδρούν με τα αντισώματα.
Και το δεύτεροη αντίδραση δεν ισχύει για ορολογικά, καθώς τα ερυθρά αιμοσφαίρια αντιδρούν με αιμοσυγκολλητίνες που παράγονται από ιούς. Δεδομένου ότι κάθε παθογόνο δρα μόνο σε συγκεκριμένα ερυθροκύτταρα (κοτόπουλο, αρνί, μαϊμού), αυτή η αντίδραση μπορεί να θεωρηθεί εξαιρετικά ειδική.
Μπορείτε να καταλάβετε εάν μια αντίδραση είναι θετική ή αρνητική από τη θέση των αιμοσφαιρίων στο κάτω μέρος του δοκιμαστικού σωλήνα. Εάν το μοτίβο τους μοιάζει με ανεστραμμένη ομπρέλα, τότε ο επιθυμητός ιός υπάρχει στο αίμα του ασθενούς. Και αν όλα τα ερυθροκύτταρα έχουν σχηματιστεί σαν στήλη νομίσματος, τότε δεν υπάρχουν επιθυμητά παθογόνα.
Δοκιμή αναστολής αιμοσυγκόλλησης (HITA)
Αυτή είναι μια εξαιρετικά ειδική αντίδραση που σας επιτρέπει να προσδιορίσετε τον τύπο, τον τύπο των ιών ή την παρουσία συγκεκριμένων αντισωμάτων στον ορό αίματος του ασθενούς.
Η ουσία του έγκειται στο γεγονός ότι τα αντισώματα που προστίθενται στον δοκιμαστικό σωλήνα με το υλικό δοκιμής εμποδίζουν την εναπόθεση αντιγόνων στα ερυθροκύτταρα, σταματώντας έτσι την αιμοσυγκόλληση. Αυτό είναι ένα ποιοτικό σημάδι της παρουσίας στο αίμα ειδικών αντιγόνων για τον συγκεκριμένο ιό που αναζητείται.
αντίδραση ανοσοφθορισμού (RIF)
Η αντίδραση βασίζεται στην ικανότητα ανίχνευσης συμπλεγμάτων AG-AT με μικροσκόπιο φθορισμού μετά την επεξεργασία τους με βαφές φθορισμού. Αυτή η μέθοδος είναι εύκολη στον χειρισμό, δεν απαιτεί απομόνωση καθαρής καλλιέργειας και απαιτεί λίγο χρόνο. Είναι απαραίτητο για την ταχεία διάγνωση μολυσματικών ασθενειών.
Στην πράξη, αυτές οι ορολογικές αντιδράσεις χωρίζονται σε δύο τύπους: άμεσες και έμμεσες.
Το Direct RIF παράγεται απόαντιγόνο, το οποίο υποβάλλεται σε προεπεξεργασία με φθορίζοντα ορό. Και η έμμεση είναι ότι πρώτα το φάρμακο αντιμετωπίζεται με ένα συμβατικό διαγνωστικό που περιέχει αντιγόνα για τα αντισώματα που μας ενδιαφέρουν και στη συνέχεια εφαρμόζεται εκ νέου ο ορός φωταύγειας, ο οποίος είναι ειδικός για τις πρωτεΐνες του συμπλέγματος AG-AT, και τα μικροβιακά κύτταρα γίνονται ορατά στο μικροσκόπιο.
